货号

M036

种属

小鼠

生长特性

圆形，悬浮生长

培养条件

培养基：RPMI-1640 + 10% FBS (推荐HAKATA优等胎牛血清
，货号:HN-FBS-500)

温度：37℃     气相：95%空气，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台
，打开瓶口，将其中的培养液去掉
，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2天换一次液
；

2.待细胞长满瓶底面积70-80%
，需要对其进行传代，传代比例为1:3-1
：5；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37℃预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于室温孵育消化（第一次消化需置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化）
，消化好后加入3ml完全培养基终止消化

。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞
，使之完全脱落
，然后收集细胞悬液
，1000rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

保存

冻存条件

： 90%FBS+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞
，不能预热后使用。)

保存条件：液氮存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂
，培养液有漏液
：细胞极大可能会污染，所以88bifa会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为新鲜培养基

3.细胞漂浮

：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱
。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉
，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%
，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，88bifa的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。